通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的細胞稱為細胞株。穩(wěn)定細胞株篩選一般是將外源DNA克隆到具有某種抗性或選擇基因的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的選擇標志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。西生物醫(yī)藥提供穩(wěn)定細胞株篩選服務。 肝細胞癌(HCC)是一種最常見的腫瘤，也是全球引發(fā)癌癥患者死亡的第3大原因。肝癌細胞株是通過克隆培養(yǎng)法或通過篩選培養(yǎng)法從肝癌病理組織中分離出單細胞后，由單個細胞不斷分裂增殖形成的細胞群，具有與原代組織極為相似的特性和人體完整的遺傳基因，并能穩(wěn)定傳代。人肝癌細胞株因其分離來源的親本患者不同故名稱各異，所以根據(jù)它的來源不同而命名的細胞株稱為人肝癌細胞系。
下面來對國內(nèi)較為常用的幾株人肝癌細胞系的特性、優(yōu)勢及其在實驗中的應用進行整理，為腫瘤學者實驗研究提供參考。
1、 SMMC-7721人肝癌細胞株
SMMC-7721細胞系是于1977年建立，材料取自一名50歲男性原發(fā)性肝細胞癌HCC患者的手術(shù)切除標本進行體外培養(yǎng)而得。其生物學特性如下: 細胞系生長較迅速穩(wěn)定，在原代細胞開始傳代階段增殖緩慢，以后趨于穩(wěn)定而迅速生長；細胞形態(tài)為上皮樣；貼壁生長；細胞的亞微結(jié)構(gòu)形態(tài)符合癌細胞的一般特征；甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)免疫熒光染色呈陽性；LDH同工酶譜的變化與肝癌細胞的一般特征一致；免疫缺陷小鼠體內(nèi)可成瘤率高，動物異種后瘤結(jié)節(jié)經(jīng)病理切片檢查，其組織形態(tài)和原手術(shù)切除標本類似。
2、Bel-7402人肝癌細胞株
Bel-7402于1974年建立，來源于一位53歲男性肝癌患者的手術(shù)切除標本，屬于HCC。生物學特性如下: 細胞增長迅速而恒定，6-7 d可傳代1次；細胞形態(tài)以多邊形上皮樣占絕大多數(shù)；貼壁生長；細胞染色體中有一大而長的近端著絲點染色體，出現(xiàn)頻率高，是本株細胞的標記染色體；AFP免疫熒光反應陽性；LDH、G6PD、TAT等酶代謝及細胞的超微結(jié)構(gòu)基本上保持臨床人體肝癌的特性；異種接種后成瘤率高，3-4 d可成瘤，瘤塊組織學病理與臨床HCC相近。
3、 MHCC97人肝癌細胞株
該細胞系由上海醫(yī)科大學中山醫(yī)院建立, 將一名我國39歲男性HCC患者的肝右葉轉(zhuǎn)移病灶的手術(shù)切除標本接種于裸鼠肝內(nèi)建造出人肝癌裸鼠轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)而得。已證實, 經(jīng)過再次分離得到的MHCC97H、MHCC97L及HCCLM3 3種細胞株，依據(jù)它們的轉(zhuǎn)移特點，雖來源同一父系，但具有異質(zhì)性，即具有不同的轉(zhuǎn)移潛能。
MHCC97人肝癌細胞系于1998年從裸鼠人肝癌轉(zhuǎn)移模型(LCI-D20)體外傳代培養(yǎng)獲得，該細胞系符合一般人惡性腫瘤的病理學和遺傳學特征，細胞呈上皮樣，貼壁生長，血清HBsAg、AFP高表達，成瘤率高且優(yōu)先轉(zhuǎn)移的靶器官是肺，肺轉(zhuǎn)移率100%，故證實該細胞系為高轉(zhuǎn)移特性的人肝癌細胞系。
2001年，研究者從MHCC97細胞系中發(fā)現(xiàn)并分離出不同轉(zhuǎn)移潛能的2個細胞系MHCC97-H和MHCC97-L，前者肺轉(zhuǎn)移率100%，后者40%；從生長速度上，前者細胞倍增時間較后者短；穿透人工基底膜能力前者較后者大； 前者均較后者活力強、代謝旺。傳代至20代后，兩種形態(tài)學特征及生長速度方面均較穩(wěn)定。之后又從MHCC97-H裸鼠接種后成功得到更高轉(zhuǎn)移潛能的HCCLM3細胞系。
4、HepG2人肝母細胞瘤
1979年，從阿根廷一名15歲高加索男孩的原發(fā)性肝胚細胞瘤中分離出并建立, 該細胞系呈上皮樣; 貼壁抱團生長; 生長較快, 傳代周期為1-2d; 低轉(zhuǎn)移; 裸鼠中成瘤率較差; AFP陽性; HBsAg陰性, 然而目前尚未證明該細胞中有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基因組; 但通過實驗已證實, 該細胞系分化程度較高, 細胞里代謝酶的生物轉(zhuǎn)化特性較完整, 不需加入外源性活化系統(tǒng)。在藥物作用相關(guān)研究中代謝酶保持穩(wěn)定, 不會因傳代次數(shù)增多而有所改變, 所含有的生物轉(zhuǎn)化代謝酶與人正常肝實質(zhì)細胞同源, 因此, 常被用于體外肝細胞代謝或遺傳毒性試驗方面的理想細胞系. 其中, HepG2.2.15是目前應用較為廣泛的細胞株, 它是HepG2的衍生物是體外篩選抗HBV藥物的良好模型, 并用于抗HBV新藥開發(fā)的體外研究工具。
5、Hep3B人肝癌細胞株
Hep3B分離自8歲美國黑人男童的肝癌組織. 細胞形態(tài)跟HepG2類似, 呈上皮細胞, 電鏡下觀察胞漿里面很多粗大的黑顆粒, 同樣喜抱團貼壁生長; 其在裸鼠中能致瘤, 但基本不轉(zhuǎn)移. HBV陽性, 這與HepG2不同, 這株細胞整合了完整的HBV基因組，可用于HBV感染后發(fā)展致癌相關(guān)研究。
6、 Huh-7人肝癌細胞株
該細胞系于1982年從一名患有肝癌的57歲日本男性肝癌組織標本上培養(yǎng)而得。該細胞AFP陽性，高度分化, 細胞呈上皮樣, 貼壁生長. 特點是HBV陰性, 而具有丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)易感性，故可用于HCV與肝癌的關(guān)系的研究. 除了用于研究致癌性, 還用于基因表達的調(diào)節(jié)機制、新陳代謝及VLDL的分泌等. 此細胞系的特別之處如下: 可用于生產(chǎn)重組蛋白如促紅細胞生成素; 在蛋白質(zhì)生物學方面用于研究在肝細胞內(nèi)復制的登革病毒; 廣泛用于異種移植動物模型.
7、 PLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細胞
PLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細胞于1976年建系, 細胞來自一位患有原發(fā)性HCC的莫桑比克男性患者的標本; 為上皮樣貼壁生長; AFP陽性, 不產(chǎn)生白蛋白; 分泌ad亞型的HBsAg而不產(chǎn)生HBcAg或HBeAg和Dane顆粒, 卻可維持HAV的繁殖; 該細胞可能含有全部HBV基因組, 同工酶譜及核型與人類同源; 裸鼠異種移植可致瘤. 此細胞系因其產(chǎn)生HBsAg的物理化學和免疫化學特性跟HBV攜帶者血清中HBsAg相似, 因此, 可被用來研究HBV體外病毒及其與原發(fā)性肝癌的關(guān)聯(lián), 抗HBV疫苗所需的HBsAg顆粒的制備及抗病毒藥物的制備等方面。
人肝癌細胞系具有以下優(yōu)點：
首先，在選擇實驗對象的比較上，人肝癌細胞系相較于人原代肝細胞，克服了人原代肝細胞來源困難、實驗難控制、存活時間短的局限，肝癌細胞系為已獲得的穩(wěn)定傳代的細胞，具有來源方便、操作簡單、條件可控和可重復等優(yōu)點，是用于肝癌疾病相關(guān)研究的理想對象。
其次，肝癌細胞系均選擇來源于確診肝癌患者的病理組織，具有與肝癌患者體內(nèi)相似的遺傳基因組，其發(fā)生發(fā)展機制、功能蛋白表達、病毒復制能力、侵襲轉(zhuǎn)移功能及抗藥性等，具有與人類親源體極其相近的特點，因此更適合應用于肝癌各領(lǐng)域的研究.
